标准编号:	GB 5009.299-2024
中文名称:	食品安全国家标准食品 中乳铁蛋白的测定
英文名称:	National food safety standard-Determination of lactoferrin in food
中标分类:	X09    卫生、安全、劳动保护
行业分类:	GB    国家标准
发布机构:	国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局
发布日期:	2024-2-8
实施日期:	2024-8-8
标准状态:	valid
翻译语言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符数:	8000 字
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GB 5009.299-2024 National food safety standard - Determination of lactoferrin in food 1 Scope This standard specifies the high performance liquid chromatography (HPLC) for the determination of lactoferrin in food. This standard is applicable to the determination of bovine lactoferrin in pasteurized milk, modified milk, milk beverages, modified milk powder, and milk-based formula foods for infant and young children. This standard is not applicable to the determination of bovine lactoferrin in flavored fermented milk and bean-based formula foods for infant and young children. 2 Principle The bovine lactoferrin in the specimen is extracted via phosphate buffer solution, enriched and purified by heparin affinity column, separated by reversed-phase high performance liquid chromatograph column, detected by ultraviolet light at 280 nm, and quantified with the external standard method. 3 Reagents and materials Unless otherwise stated, reagents used in this method are all analytically pure, and water is of Grade 1 as specified in GB/T 6682. 3.1 Reagents 3.1.1 Acetonitrile (CH3CN): Chromatographically pure. 3.1.2 Trifluoroacetic acid (CF3CO2H): Chromatographically pure. 3.1.3 Sodium chloride (NaCl). 3.1.4 Phosphoric acid (H3PO4). 3.1.5 Disodium hydrogen phosphate (Na2HPO4).   3.2 Preparation of reagents 3.2.1 Phosphate buffer solution I: Weigh 7.1 g of disodium hydrogen phosphate and 58.4 g of sodium chloride, add 900 mL of water to dissolve them, adjust the pH to 8.0 ± 0.2 with phosphoric acid, and then dilute it to 1,000 mL with water. Freshly prepare before use. 3.2.2 Phosphate buffer solution II: Weigh 28.4 g of disodium hydrogen phosphate, add 900 mL of water to dissolve it, adjust the pH to 7.5 ± 0.2 with phosphoric acid, and then dilute it to 1,000 mL with water. Freshly prepare before use.

1 Scope 2 Principle 3 Reagents and materials 4 Instruments and apparatus 5 Analytical procedures 6 Expression of analysis results 7 Precision 8 Others Annex A Liquid chromatogram of the bovine lactoferrin standard solution Annex B Method for verifying heparin affinity column

1 范围 本标准规定了食品中乳铁蛋白的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料、调制乳粉及乳基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白含量的测定。 本标准不适用于风味发酵乳、豆基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白的测定。 2 原理 试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取，肝素亲和柱富集净化后，反相高效液相色谱柱分离，紫外检测器于280nm处检测，外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN)：色谱纯。 3.1.2 三氟乙酸(CF3CO2H)：色谱纯。 3.1.3 氯化钠(NaCl)。 3.1.4 磷酸(H3PO4)。 3.1.5 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.2 试剂配制 3.2.1 磷酸盐缓冲液Ⅰ：称取7.1g磷酸氢二钠、58.4g氯化钠，加900mL水溶解，用磷酸调pH至8.0±0.2，加水定容至1000mL，临用现配。 3.2.2 磷酸盐缓冲液Ⅱ：称取28.4g磷酸氢二钠，加900mL水溶解，用磷酸调pH至7.5±0.2，加水定容至1000mL，临用现配。 3.2.3 0.1％三氟乙酸溶液：量取1mL三氟乙酸注入900mL水中，用水稀释至1000mL，过0.45μm滤膜。 3.3 标准品 牛乳铁蛋白标准品(CAS号：146897-68-9)：纯度≥95％，铁含量≤35mg/100g，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。 注：标准品可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 牛乳铁蛋白标准储备溶液(5.0mg/mL)：称取50mg(精确至0.1mg)牛乳铁蛋白标准品用水溶解，转移至10mL容量瓶并定容至刻度，混匀，0℃～4℃条件下保存，可保存3个月。 3.4.2 牛乳铁蛋白标准中间溶液(0.50mg/mL)：吸取1.0mL牛乳铁蛋白标准储备溶液，用磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至10mL，临用现配。 3.4.3 牛乳铁蛋白标准系列工作溶液：准确移取上述牛乳铁蛋白标准中间溶液，用磷酸盐缓冲液Ⅰ稀释定容，配制成浓度分别为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL和200.0μg/mL的标准系列工作液，临用现配。 3.5 材料 3.5.1 肝素亲和柱：1mL，柱容量≥2mg，或性能相当者(验证方法见附录B)。 注：使用不同厂商的肝素亲和柱，在样品提取、上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同，应根据肝素亲和柱特点进行优化。 3.5.2 滤膜，水相，0.45μm。 3.5.3 水相针头滤器：聚醚砜材质，0.45μm。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或相当者。 4.2 天平：感量分别为0.01g和0.1mg。 4.3 冷冻离心机：4℃，转速≥10000r/min。 4.4 pH计：精度为0.01。 4.5 涡旋振荡器。 4.6 恒温水浴锅。 4.7 固相萃取柱装置。 5 分析步骤 5.1 样品前处理 5.1.1 试样制备 取有代表性的样品至少200g，液态样品摇匀后储存于容器中作为试样，于0℃～4℃保存，备用；固态样品混匀后储存于容器中作为试样，常温下干燥保存，备用。 5.1.2 试样提取 5.1.2.1 液态试样(巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料) 称取5g(精确至0.01g)试样于烧杯中，加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ提取，分次将样品转移至25mL容量瓶，用磷酸盐缓冲液Ⅱ定容至刻度，充分混匀后转入离心管，在4℃条件下10000r/min离心8min，取样液待净化。 5.1.2.2 固态试样(调制乳粉、乳基婴幼儿配方食品) 称取1g～5g(精确至0.01g)试样于烧杯中，加入温热(温度不超过50℃)的磷酸盐缓冲液Ⅱ，搅拌使样品溶解，冷却至室温，分次将样品转移至50mL容量瓶并用磷酸盐缓冲液Ⅱ定容至刻度，充分混匀后转入离心管中，取40.0mL溶液在4℃条件下10000r/min离心8min，取样液待净化。